亲和层析法纯化 IgG 抗体

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亲和层析法纯化 IgG 抗体

引言

亲和层析法是一种广泛应用于生物技术中的分离纯化技术,尤其适用于大分子生物分子的分离纯化。该技术利用配基和靶分子的特异性结合特性,实现目标分子的高效选择性分离。在单克隆抗体(mAb)生产领域,亲和层析法是纯化 IgG 抗体的重要手段之一。本文将重点介绍亲和层析法纯化 IgG 抗体的原理、流程和应用,并结合具体案例进行详细阐述。

原理及流程

亲和层析法纯化的原理是将配基固定在层析介质上,利用配基与靶分子的特异性结合,将靶分子吸附在层析柱上,通过洗脱液洗脱非靶分子,最终实现靶分子的纯化。

亲和层析法纯化 IgG 抗体的流程一般包括以下步骤:

1. 样品预处理:对粗提液进行澄清、过滤等预处理,去除杂质和沉淀。

2. 层析柱平衡:将配基层析柱用平衡缓冲液平衡,使层析柱达到稳定状态。

3. 样品上柱:将预处理后的样品上柱,让样品与配基层析介质充分接触。

4. 洗脱:用洗脱缓冲液洗脱层析柱,洗脱非靶分子和弱结合的杂质。

5. 靶分子洗脱:根据配基与靶分子的结合强度,选择合适洗脱缓冲液洗脱靶分子。

6. 洗脱液收集:收集洗脱液,并对洗脱液进行检测,确定靶分子洗脱峰。

7. 纯化产物收集:收集靶分子洗脱峰,即为纯化的 IgG 抗体。

应用实例

亲和层析法纯化 IgG 抗体已在生物制药、免疫学、诊断试剂等领域得到了广泛的应用。下面列举两个具体的应用实例:

实例 1:新冠病毒 IgG 抗体纯化

新冠病毒 IgG 抗体是检测新冠病毒感染的重要指标。利用亲和层析法,可以从新冠病毒感染患者的血清或血浆中纯化 IgG 抗体。具体流程如下:

1. 样品预处理:收集新冠病毒感染患者的血清或血浆,并进行离心澄清。

2. 层析柱选择:选择对新冠病毒 IgG 抗体具有特异性结合的配基层析柱。

3. 洗脱:采用低 pH 洗脱缓冲液洗脱非靶分子和弱结合杂质,再用高 pH 洗脱缓冲液洗脱 IgG 抗体。

4. 纯化产物收集:收集 IgG 抗体洗脱峰,并进行检测和表征。

实例 2:单克隆抗体药物纯化

单克隆抗体药物是一种重要的生物制药,广泛用于治疗肿瘤、自身免疫性疾病等。亲和层析法是单克隆抗体药物纯化的关键步骤。具体流程如下:

1. 样品预处理:对单克隆抗体粗提液进行澄清、过滤等预处理。

2. 层析柱选择:选择对单克隆抗体 Fab 片段或 Fc 片段具有特异性结合的配基层析柱。

3. 洗脱:采用不同 pH 或盐浓度的洗脱缓冲液洗脱非靶分子和杂质,再用酸性洗脱液洗脱单克隆抗体。

4. 纯化产物收集:收集单克隆抗体洗脱峰,并进行检测和表征。

结语

亲和层析法是一种高效、特异的 IgG 抗体纯化技术,在生物制药、免疫学、诊断试剂等领域有着广泛的应用。通过合理选择配基层析介质和优化洗脱条件,可以实现 IgG 抗体的快速、高纯度纯化,为后续的抗体检测、药物开发和临床应用提供高质量的抗体原料。随着科学技术的不断进步,亲和层析法纯化技术也将得到进一步的发展和完善,为生物医药行业的蓬勃发展提供强有力的技术支撑

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